PCR analīze: kas tas ir? Kā lietot PCR analīzi

Tas nav tik sen izstrādājusi drošu, ļoti jutīgu un ātru metodi diagnostikā dažādu infekcijas slimību cilvēkiem. Šāda metode tiek saukta par "PCR analīze". Kas ir tas, kāda ir tās būtība, ko viņš var noteikt, mikroorganismu un to, kā ņemt to, mēs aprakstīt šajā rakstā.

Vēsture atklāšana

Izgudroja polimerāzes ķēdes reakciju (PĶR) ir amerikāņu zinātnieks Keri Myullis 1983. Sākotnēji patentēta metode diagnozi ar "Valis Corporation", kurā viņš strādāja, un tās autors. Bet 1992. gadā visas tiesības un patenti tika pārdotas uzņēmumam "Hoffman-La Roche". Pēc tam izrādījās, ka līdzīgi pētījumi tika veikti paralēli, un tika ziņots, citas ASV biologu, piemēram, Elis Chen, David Edgar, John rre. 1980. gadā viņš nodarbojas ar šo jautājumu, un padomju zinātnieku A. Slyusarenko A. Kaledin un S. Gorodecka. Tāpēc, lai noteiktu, vienīgais autortiesību īpašnieks nav bijis iespējams. Daudzi izcili bioķīmiķi ir veicinājusi attīstību metožu polimerāzes reakcijas un CERN patentētu savu izgudrojumu. Šajā brīdī analīzes PĶR tiek veikta visā speciāli aprīkotas laboratorijas.

KOPSAVILKUMS PCR diagnostikas

PCR analīze: kas tas ir un kā tas darbojas? Metodes būtība ir tā, ka, izmantojot speciālu ferments DNS polimerāzes in vitro, lai palielinātu šķidruma konkrētā mikrobu vidē. Lai to izdarītu atkārtoti reizināt pieejamo DNS materiālu. Tādējādi patogēna klātbūtni paraugā summa tiks palielināta rēķina bioķīmiskās laboratorijas manipulācijas, un baktērijas nebūs grūti noteikt mikroskopa.

Kā studiju materiāla?

Lai veiktu nepieciešamo analīzi:

• DNS veidne;
• praimeri materiāls, kas savieno galus fragmenta;
• thermostable DNS polimerāze fermentu;
• ķimikālijas, nodrošinātu pareizu darbību enzīmi;
• buferšķīdums ir nepieciešams, lai radītu piemērotus apstākļus augšanas un attīstības DNS materiālu.

Lai veiktu PCR darboties 25-30 atkārtots, kas sastāv no trim soļiem: denaturācija, apdedzināšanai un pagarināmību.

Analizēt polimezarnoy ķēdes reakciju, izmantojot īpašu ierīci - karstuma kameras. Mūsdienu iekārtas ļauj uzstādīt nepieciešamo apkures un dzesēšanas caurules programmu, lai novērstu kļūdas diagnozes laikā.

Kur piemērot diagnozi?

Polimezarnoy ķēdes reakcija metode tiek izmantoti dažādās nozarēs medicīnā:

• Kriminālistikas lietošana tā, lai identificētu ģenētisko materiālu, piemēram, matu, siekalām vai asinīm;
• PCR analīze asins palīdz genotipēšanai, piem atklāšanai individuālā ģenētiskā apstādīto reaģējot uz konkrētiem narkotiku;
• izmantojot metodi, noteikt ģimenes saites starp cilvēkiem;
• pieprasītākais PĶR metode ir kļuvusi medicīniskajā diagnostikā noteikšanai dažādām infekcijas slimībām.

Ko infekcijas atklāj PCR?

Tādējādi, medicīna jau sen ir veiksmīgi izmantots PCR analīzi. Kas tas ir, mēs jau esam iemācījušies. Un daži patogēni var noteikt ar to? PCR diagnosticēta šādas infekcijas :

• hepatīta A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidozes;
• hlamīdija;
• mikoplazmozes;
• bakteriālā vaginoze;
• infekcijas mononucleosis;
• trihomonoze;
• HPV infekcija;
• tuberkuloze;
• herpes infekcija ar 1. un 2. veida;
• Helicobacter pylori infekcija;
• citomegalovīrusa;
• difterija;
• salmoneloze;
• HIV infekcija.

Arī PCR metodes tiek izmantotas diagnostikā vēzi.

priekšrocības metodes

Diagnostikas PCR ir vairākas priekšrocības:

1. Augsta jutība. Pat ar tikai daži DNS molekulu mikroorganisma PCR analīze nosaka klātbūtni infekcijas. Tas palīdz metodi hronisku un slēpti slimības rašanos. Bieži šādos gadījumos mikroorganisms ir nekultivētu citos veidos.
2. Lai izpētītu jebkura piemērota materiāla, piemēram, siekalām, asinīm, seksuālās selekcijas, matu, epitēlija šūnas. Visizplatītākais ir asins analīze un uroģenitālā tamponu PCR.

3. Nav nepieciešama ilgāku augošās kultūras. Automatizēta process diagnostikas ļauj iegūt rezultātus pētījuma pēc 4-5 stundām.
4. ir gandrīz pilnīgi autentiski metode. Ierakstīta tikai reti viltus negatīvs rezultāts.
5. Spēja noteikt vairāku veidu patogēnu viena parauga materiāls. Tas ne tikai paātrina procesu, slimības diagnozi, bet arī ievērojami samazina materiālu izmaksas. Bieži vien ārsts visaptverošu analīzi PCR. Cenu aptauja, kas sastāv no nosakot sešas patogēnus, ir aptuveni 1500 rubļu.

Ieteikumi sagatavošanu analīzei

Rezultāti būtu derīgs PCR pētījumi ir jāpārbauda, pēc ieteikumiem sākotnējos sagatavošanās diagnozes:

1. Pirms piegādes siekalām būtu jāatturas no ēšanas un narkotiku 4 stundas pirms izlases materiālu. Tieši pirms procedūras, izskalot muti ar vārītu ūdeni.
2. Iepriekš minētie noteikumi ir jāvadās, un, ja, ņemot paraugu no iekšpuses uz vaiga. Pēc skalošanas ieteicams veikt vieglu masāžu uz ādas, lai atbrīvotu prostatas sekrēciju.
3. Urīna parasti savāc mājās. Lai to izdarītu, jums ir nepieciešams, lai veiktu rūpīgu tualeti no dzimumorgāniem. Sterilā plastmasas traukā ir nepieciešams, lai savāktu 50-60 ml urīnu. Tā ieteicama sievietēm, ievietot tamponu vagīnā, un vīriešiem, cik vien iespējams, lai vilktu ādas reizes, lai nodrošinātu tīrību materiāla. Jūs nevarat veikt materiālu menstruāciju laikā.
4. Piegādei spermas atturēties no dzimumakta 3 dienas pirms savākšanas materiālu. Arī ārsti ir ieteicams atteikties izmantot saunu un karstā vannā, alkohola un pikantu pārtikas produktiem. 3 stundas pirms analīzes ir nepieciešams atturēties no urinēšana.
5. Lai nokārtotu uroģenitālā uztriepi, piemēram, ja analīzes uz hlamīdijām PCR, gan sievietes, gan vīrieši, ir ieteicams, ka seksuālā pārējo 3 dienas. 2 nedēļas pirms analīzes nevar lietot antibiotikas. Par nedēļu jums ir nepieciešams pārtraukt izmantot intīmās želejas, ziedes, maksts svecītēm, Douching. 3 stundas pirms pētījuma būtu jāatturas no urinēšana. Laikā menstruācijas žogs materiāls netiek veikta, tikai 3 dienas pēc izbeigšanas smērēšanās var veikt uroģenitālā uztriepes.

PCR grūtniecības laikā

Gaidīšanas laiks bērnu, daudzas infekcijas slimības, seksuāli transmisīvās slimības, ir ļoti bīstami normālu augļa attīstību. STS var izraisīt intrauterīnā attīstību, spontānais aborts vai priekšlaicīgas dzemdības, kroplības bērnu. Tāpēc ir svarīgi, lai saņemtu grūtniecības sākumā skrīninga PCR. Pass analīze ir nepieciešama, reģistrējoties - līdz 12 nedēļām.

Žogs materiāls nāk no kakla kanāla ar īpašu sukām. Procedūra ir nesāpīga un nerada apdraudējumu bērnam. Parasti grūtniecības laikā analizēti hlamīdiju PCR metodi, kā arī ureaplasmosis, mikoplazmozes, citomegalovīrusu, herpes, papilomas laikā. Šāda pārbaude komplekss sauc PCR 6.

PCR diagnosticēšanai HIV

Sakarā ar to, ka metode, polimerāzes ķēdes reakcijas ir ļoti jutīgi pret izmaiņām organismā un nosacījumiem diagnozi, daudzi faktori var ietekmēt lietas iznākumu. Tāpēc, analīze PCR HIV infekciju nav uzticama metode, tās efektivitāte - 96-98%. Atlikušie 2-4% no testa dod viltus pozitīvus rezultātus.

Bet dažos gadījumos bez PCR diagnosticētu HIV nevar darīt. Parasti tas tiek veikts, lai cilvēkiem ar viltus negatīvs ELISA. Šie skaitļi liecina, ka persona vēl nav izstrādājusi antivielas pret vīrusu, un to nevar atklāt bez skaita palielināšanu vairākiem. Ka tas var sasniegt, veicot asins analīzes PĶR metodi.

Vajadzīgi arī ir diagnoze bērnu pirmā dzīves gadā, dzimis HIV pozitīvām mātēm. Metode ir vienīgais veids, lai ticami noteiktu statusu bērna.

PCR diagnosticēšanai hepatīta

Polimerāzes ķēdes reakcija metode ļauj noteikt DNS vīrusa A, B, C, hepatīta labi pirms antivielu veidošanos uz infekcijas vai simptomu parādīšanās. Īpaši efektīvs ir PCR analīze par C hepatītu, tā kā 85% no šīs slimības ir asimptomātiski un bez ārstējot savlaicīgi kļūst hronisks.

Savlaicīga atklāšana patogēna palīdzēs izvairīties no sarežģījumiem un ilgstošu ārstēšanu.

Integrated PCR screening

Visaptveroša PCR analīze: kas tas ir? Šī aptaujas metode polimezarnoy ķēdes reakcija, kas ietver definīciju vairāku veidu infekcijas: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, citomegalovīrusu, ureaplasmas urealitikum, herpes 1. un 2. tipa, gonoreju, cilvēka papilomas vīrusa. Šīs diagnozes cena svārstās no 2000 līdz 3500 rubļu. atkarībā no klīnikas, materiālu un iekārtu, kā arī par analīzes veida: kvantitatīva vai kvalitatīva. Kas ir nepieciešams jūsu gadījumā - ārsts izlemj. Dažos gadījumos, jūs vienkārši klātbūtnes patogēna citiem, piemēram, HIV, svarīgo lomu kvantitatīvo titrs. tekstā "PCR analīze 12" ar diagnozi visu iepriekš minēto patogēnie pārbaudi.

Atšifrēt analīzes rezultātus

Transkripcija PCR analīze ir vienkārša. Ir tikai 2 indekss skala - ". Negatīvs", "pozitīvi", un Pēc atklāšanas patogēna var ārsti ar 99% ticamību -th apstiprinātu slimības klātbūtni, un, lai sāktu ārstēšanu pacientam. Kvantitatīvajā noteikšanas metodi infekcijas atbilstošu kolonnu indeksa skaitu atklāto baktēriju tiks precizēts. Tikai ārsts var noteikt, cik lielā mērā, ka slimības un noteikt nepieciešamo ārstēšanu.

Dažos gadījumos, piemēram, nosakot, HIV infekcijas, izmantojot PĶR, ar negatīvu rezultātu, ir nepieciešams papildu apsekojumi, lai apstiprinātu šos skaitļus.

Kur pārbaudīties?

Kur pass-PCR analīze sabiedrībai klīnikā vai privāta laboratorija? Diemžēl pašvaldības medicīnas iestāžu aprīkojumu un metodēm, bieži vien novecojusi. Tāpēc ir labāk dot priekšroku privātām laboratorijām ar modernu aprīkojumu un augsti kvalificētu personālu. Turklāt privātā klīnikā jūs saņemsiet rezultātus daudz ātrāk.

Maskavā, daudzas privātas laboratorijas piedāvā PCR analīzi dažādām infekcijām. Piemēram, tādās klīnikas kā "Vita", "Integrētā Clinic", "Happy Family", "Uro-Pro", veic PCR analīzi. Aptauja cena ir 200 rubļu. lai noteiktu Patogēna.

To var secināt, ka diagnoze infekcijas slimību PĶR vairumā gadījumu ir ātrs un uzticams veids, kā atklāt patogēnu organismā pie sākumposmā infekcijas. Tomēr, atsevišķos gadījumos, lai izvēlētos citas diagnostikas metodes. Noteikt nepieciešamību šādu pētījumu var būt tikai speciālists. PCR analīze atšifrēšanas nepieciešama arī profesionālu pieeju. Sekojiet ārsta norādījumus un nedod savu testu, kas nav vajadzīgas.